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作育基
产品说明
卵巢癌类器官作育基是一种为增进人源卵巢癌类器官体形状成和扩增而开发的作育基。。 。。它是一种无菌的液体混淆系统 ，，，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。。 。。该作育基的奇异配方可以提供一个合适的人源卵巢癌类器官体外作育情形 ，，，选择性地增进体外人源卵巢癌类器官的生长。。 。。
使用说明
2~8℃避光生涯2个月内有用。。 。。
1. 卵巢癌类器官作育
将获取的卵巢癌原代细胞悬液计数 ，，，凭证盘算好的体积吸收细胞悬液加入预冷的1.5 mL离心管中 ，，，补齐预冷的卵巢癌类器官作育基至所需体积 ，，，将预冷后的细胞悬液加入等体积的Matrigel基质胶(Corning)中轻轻混匀(全程冰上操作) ，，，使得卵巢癌原代细胞终浓度为5X105个细胞/毫升。。 。。然后将细胞与基质胶的混淆液凭证50-60 μL/孔呈半球形点胶于24孔板。。 。。将作育板放入5%CO2、37℃作育箱终至少30 min ，，，待Matrigel胶完全凝固。。 。。沿孔壁每孔缓慢加入500 μL预先恢复至室温的类器官作育基 ，，，置5%CO2、37℃作育箱作育。。 。。3天后镜下视察类器官形成情形 ，，，粒径大于30~50 μm即以为类器官已经形成 ，，，每5天替换一次作育基举行作育 ，，，一连视察类器官巨细 ，，，镜下视察大部分类器官巨细均大于30~50 μm且巨细不再增大即可网络类器官举行后续实验。。 。。
2. 卵巢癌类器官网络
弃作育基 ，，，每孔加入500 μL预冷DF12 ，，，重复奏乐至基质胶完全脱离板底 ，，，网络至15 mL离心管中 ，，，1500 rpm离心5 min ，，，轻轻吸去上清和基质胶层 ，，，待用。。 。。
3. 卵巢癌类器官传代
网络的类器官 ，，，加入3-5 mL类器官解离试剂（PRS-ODR） ，，，37℃ ，，，200 rpm水平摇床振荡消化（详细时间凭证类器官巨细和数目决议 ，，，以肉眼可见颗粒显着减小一半为准 ，，，可中心作废化的类器官显微镜视察 ，，，类器官消化至包括有3~10个细胞的细胞团块最佳）；；消化完全后接纳等体积的含10% FBS的DMEM作育基终止消化。。 。。1500 rpm离心3 min ，，，弃上清 ，，，使用洗濯液重悬沉淀后1500 rpm再次离心3 min；；加入预冷的胃癌类器官作育基举行重悬 ，，，计数 ，，，凭证作育办法操作继续作育。。 。。
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